TP : mesurer le stress en laboratoire
Mise en situation
Au cours de la réponse « lente » au stress aigu, les glandes cortico-surrénales sécrètent une hormone, le cortisol.
Une personne victime de stress aigu ou de stress chronique présente donc un taux de cortisol plasmatique mais également salivaire supérieur à la normale. Cela explique que le dosage du cortisol salivaire soit devenu un indicateur de ce phénomène.
Mme X vient consulter son médecin car elle souffre de migraines, d’une fatigue intense, elle a des palpitations cardiaques et se sent irritable et angoissée.
Son médecin veut savoir si les symptômes de Mme X peuvent être dus à un stress.
Document 1 : cycle de sécrétion du cortisol chez un individu sain.
La sécrétion du cortisol par les glandes surrénales suit un rythme cyclique au cours de la journée.
Document 2 : principe du test d’immunodiffusion de Mancini.
Protocole de dosage du taux de cortisol salivaire (test d'immunodiffusion de Mancini)
Réaliser un test de Mancini pour doser le taux de cortisol de la salive de Mme X par comparaison à des solutions de concentrations connues en cortisol :
Utiliser le gabarit de perçage et creuser à l’aide du tube emporte-pièce 6 puits dans la gélose contenant les anticorps.
Éliminer les disques de gélose avec le cure-dent sans fendre la gélose.
Faire un repère par un trait au stylo permanent sur le côté de la boîte (fond et couvercle).
Numéroter, sur le fond de la boîte, les puits de 1 à 6 avec le feutre.
Remplir les différents puits avec 30 à 40 μL des différentes solutions, en utilisant la micropipette. Les solutions ne doivent pas déborder des puits. Précaution : changer le cône à chaque prélèvement de solution de concentration ou de nature différente.
Puit n°1 : solution de cortisol à 2ng/mL
Puit n°2 : solution de cortisol à 5ng/mL
Puit n°3 : solution de cortisol à 10ng/mL
Puit n°4 : salive de Mme X récoltée à 8h du matin
Puit n°5 : salive de Mme X récoltée à minuit
Puit n°6 : salive d'un témoin sain récoltée à 8h du matin
Fermer la boîte et attendre que les réactions aient lieu.