TP : la respiration cellulaire
Mise en situation
Différentes études suggèrent que la respiration cellulaire se déroule dans les mitochondries, mais qu’une première étape, la glycolyse, se déroule dans le hyaloplasme.
Schéma des 3 phases de la glycolyse
Les cercles violets représentent les atomes de carbone.
Pi représente le groupe phosphate.
Objectif
On cherche à savoir si la glycolyse est une étape indispensable à la réalisation de la respiration cellulaire.
Protocole
OBTENTION DE MITOCHONDRIES A PARTIR DE CELLULES VEGETALES
Pour étudier le rôle des mitochondries, il est nécessaire de les isoler.
Mixer 60 g de morceaux de navets dans 80 mL de tampon phosphate pH 7.4 (permet de briser les cellules végétales).
Filtrer le jus sur deux compresses dans le bécher.
Renouveler l'opération 4 fois.
Aérer la suspension pendant 5 minutes avec un bulleur si possible.
RÉALISATION DU MONTAGE EXAO
Préparer les seringues d’injection des différents réactifs.
Placer de l’eau à 40°C dans de l’enceinte autour de la cuve centrale.
Introduire la suspension de mitochondries bien oxygénée dans la cuve centrale.
Fermer l’enceinte.
Lancer l’agitation modérée.
Mettre la sonde en place.
RÉALISATION DES MESURES
Paramétrer le logiciel et choisir un temps d’acquisition de 5 minutes.
Lancer l’acquisition.
Au bout de 1 minutes, injecter 1mL de solution de glucose et observer l’évolution de la concentration en O2.
Après encore 1 minute, injecter 1 mL de solution de pyruvate et observer l’évolution de la concentration en O2.
INTERPRETATION
Communiquer vos résultats et interpréter afin de répondre au problème.